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Analyse du transcriptome des souches virulentes et atténuées d'Ehrlichia ruminantium et application au développement de vaccin de deuxième génération

Emboule L.. 2010. Pointe-à-Pitre : UAG, 168 p.. Thèse de doctorat -- Microbiologie moléculaire.

La bactérie intracellulaire obligatoire Ehrlichia ruminantium (ER) est l'agent pathogène responsable de la cowdriose ou heartwater chez les ruminants domestiques et sauvages. Pour élucider la pathogenèse de la bactérie dans les cellules endothéliales, l'analyse du transcriptome a été entreprise en comparant le niveau d'expression des souches Gardel virulente et atténuée dont les génomes ont été séquencés. La sélection des transcrits bactériens a été réalisé grâce à l'adaptation de la méthode SCOTS à notre modèle. Les cDNA obtenus par SCOTS ont été hybridés sur des puces à ADN pangénomique d'ER spécifiques des souches Gardel et Welgevonden.Cette étude a révélé 239 gènes différentiellement exprimés entre souche virulente et atténuée dans les cellules infectées aux 3 stades évolutifs étudiés. 116 gènes ont été détectés au temps le plus tardif de l'infection (corps élémentaires libres). Parmi les gènes surexprimés par la souche virulente, certains sont connus chez d'autres bactéries intracellulaires (R conorii.) pour leurs implications dans l'échappement à la réponse de l'hôte : réparation de l'ADN (helicase, ligase), échappement au stress oxydatif et osmotique (thioredoxine), ainsi que dans l'inhibition de la fusion des endosomes (SNARE) et dans le ralentissement de l'apoptose (Ank A). Parmi les gènes surexprimés chez la souche atténuée, certains peuvent induire une réponse immunitaire protectrice. En combinant les données génomiques des groupes de gènes potentiellement co-régulés ont été identifiés notamment le " cluster " recB. La validation des résultats par qRTPCR et l'analyse du protéome d'ER sont en cours, ce qui nous offre une perspective d'analyse fonctionnelle. (Résumé d'auteur)

Mots-clés : ehrlichia ruminantium; chèvre; protéine; vaccin; génie génétique; variation génétique; transformation génétique; ruminant; ehrlichia; guadeloupe; protéomique

Thématique : Maladies des animaux

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