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Analysis of RNA silencing systemic signal in agroinfected leaves of cocoa (Theobroma cacao L.)

Andrieu A., Lanaud C., Dedieu F., Paulin D., Breitler J.C.. 2010. In : 15th International Cocoa Research Conference : cocoa productivity, quality, profitability, human health and the environment. Lagos : Cocoa Producers' Alliance, p. 525-531. Conférence internationale sur la recherche cacaoyère. 15, 2006-10-09/2006-10-14, San José (Costa Rica).

Parmi les nombreuses approches basées sur la perte ou le gain de fonction, utilisées pour valider la fonction des gènes, de nouvelles techniques utilisant les mécanismes de l'ARN interférence ont été développées ces dernières années. Elles reposent sur l'induction de l'extinction de gènes induite par la production d'ARNs double-brins dans les cellules. L'ARN interférence repose sur un ensemble de mécanismes conservés chez les eucaryotes pour lesquels un ARN double brin va cibler la dégradation d'ARN homologues via la production de petits ARNs interférents ( siRNAs). Dans certains cas, il a pu être montré que l'extinction d'un gène induite localement par interférence de l'ARN pouvait diffuser dans l'organisme pour devenir systémique. Ces mécanismes d'extinction peuvent être induit par agroinfiltration. Cette technique permet l'expression transitoire d'ADN-T portant une cassette RNAi dans des cellules foliaires via Agrobacterium tumefaciens. La cassette RNAi est transcrite en ARN présentant une structure en épingle à cheveux qui après dégradation dans le cytosol va donner des siRNAs. Ces petits ARNs vont cibler la dégradation de tous les ARNs cellulaires qui leurs sont homologues en terme de séquence. Cette technique d'expression transitoire via Agrobacterium puisqu'elle permet d'obtenir, de manière réversible et rapide, une forte expression de gène dans une zone distincte et définie de la feuille, est utilisée pour induire l'interférence de l'ARN et étudier d'éventuels mouvements de siRNA entre cellules ou systémique. L'objectif de cette étude consiste à développer une technique d'agroinfiltration de feuille de cacaoyer permettant de déclencher la production de siRNA dans quelques cellules puis de produire des lignées KO après diffusion d'un signal systémique généralisant la dégradation ciblée des ARNs cibles à tout l'organisme. Une telle technique pourrait constituer un outil de choix pour la découverte et la validation à grande échelle de la fonction de gènes d'int

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