Rapport d'activités de recherche 1998 de Pascal Montoro Rubber Project - Kasetsart University, Bangkok, Thaïlande
Montoro P.. 1998. Bangkok : CIRAD-CP, 17 p..
Les travaux sur la mise au point de la transformation génétique chez l'hévéa ont démarré au Cirad en 1995. Le système de transfert de gène par Agrobacterium tumefaciens a été choisi pour la transformation de cellules de téguments de graine et de cals friables en prolifération qui offrent deux voies de régénération de plantes par embryogenèse somatique. L'induction de la callogenèse s'était révélée être un facteur très favorable à la transformation des téguments. Cette année, le problème de croissance des agrobactéries sur les téguments après la phase de coculture, représentait la limite majeure à la poursuite du processus. L'introduction d'une phase de lavage puis de sèchage drastique des téguments cocultivés avec les agrobactéries a permis l'obtention de cals transgéniques a plusieurs reprises. Par la suite, nos efforts devront donc porter sur l'utilisation de clones très réactifs en terme d'embryogenèse et l'établissement d'une phase de sélection de cellules transformées afin de conduire à la production d'embryons transgéniques. La transformation de cals friables était jusqu'à présent obtenue de façon aléatoire. L'expression du gène rapporteur GUS était très faible. Un fort brunissement des cultures apparaissait après quelques jours de culture ne permettant pas une prolifération des cellules transformées. Une phase de préculture des cals friables pendant 2 semaines sur différents milieux a été étudiée avant l'inoculation des cals avec les agrobactéries. L'utilisation d'un milieu de prolifération appauvri en calcium a fortement stimulé l'activité GUS enregistrée une semaine après la phase de coculture. Ce résultat majeur va permettre d'optimiser la phase d'inoculation et de coculture avec les agrobactéries, puis d'élaborer une phase de décontamination efficace afin de lutter contre la reprise de croissance des bactéries et le brunissement des cals. Parallèlement, des analyses moléculaires de type Northern ont montré que les gènes codant pour plusieurs isoformes de
Document technique
Agents Cirad, auteurs de cette publication :
- Montoro Pascal — Bios / UMR AGAP